home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9409c.zip / M9490425.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-09-19  |  4KB  |  58 lines
  1.        Document 0425
  2.  DOCN  M9490425
  3.  TI    Fusogenic mechanisms of enveloped-virus glycoproteins analyzed by a
  4.        novel recombinant vaccinia virus-based assay quantitating cell
  5.        fusion-dependent reporter gene activation.
  6.  DT    9411
  7.  AU    Nussbaum O; Broder CC; Berger EA; Laboratory of Viral Diseases, National
  8.        Institute of Allergy and; Infectious Diseases, National Institutes of
  9.        Health, Bethesda, MD; 20892.
  10.  SO    J Virol. 1994 Sep;68(9):5411-22. Unique Identifier : AIDSLINE
  11.        MED/94335053
  12.  AB    The fusogenic activities of enveloped-virus glycoproteins were analyzed
  13.        by using a quantitative, sensitive, rapid, and highly versatile
  14.        recombinant vaccinia virus-based assay measuring activation of a
  15.        reporter gene upon fusion of two distinct cell populations. One
  16.        population uniformly expressed vaccinia virus-encoded viral
  17.        glycoproteins mediating specific binding and fusion activities; the
  18.        other expressed the corresponding cellular receptor(s). The cytoplasm of
  19.        one population also contained vaccinia virus-encoded bacteriophage T7
  20.        RNA polymerase; the cytoplasm of the other contained a transfected
  21.        plasmid with the Escherichia coli lacZ gene linked to the T7 promoter.
  22.        When the two populations were mixed, cell fusion resulted in activation
  23.        of the LacZ gene in the cytoplasm of the fused cells; beta-galactosidase
  24.        activity was assessed by colorimetric assay of detergent cell lysates or
  25.        by in situ staining. We applied this approach to study the human
  26.        immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein (Env)-CD4
  27.        interaction. Beta-Galactosidase was detected within 1 h after cell
  28.        mixing and accumulated over the next several hours. Cell fusion
  29.        dependence was demonstrated by the strict requirement for both CD4 and
  30.        functional Env expression and by the inhibitory effects of known
  31.        fusion-blocking monoclonal antibodies and pharmacological agents.
  32.        Quantitative measurements indicated much higher sensitivity compared
  33.        with analysis of syncytium formation. The assay was used to probe
  34.        mechanisms of the cell type specificity for Env-CD4-mediated fusion. In
  35.        agreement with known restrictions, cell fusion occurred only when CD4
  36.        was expressed on a human cell type. Membrane vesicle transfer
  37.        experiments indicated that CD4 initially produced in either human or
  38.        nonhuman cells was functional when delivered to human cells, suggesting
  39.        that the fusion deficiency with nonhuman cells was not associated with
  40.        irreversible defects in CD4. We also demonstrated that the infectivity
  41.        specificities of different human immunodeficiency virus type 1 isolates
  42.        for peripheral blood lymphocytes versus continuous CD4+ cell lines were
  43.        associated with corresponding fusion selectivities of the respective
  44.        recombinant Env proteins. The assay enabled analysis of the fusogenic
  45.        activity of the fusion glycoprotein/hemagglutinin-neuraminidase of the
  46.        paramyxovirus simian virus 5. This system provides a powerful tool to
  47.        study fusion mechanisms mediated by enveloped-virus glycoproteins, as
  48.        well as to screen fusion-blocking antibodies and pharmacological agents.
  49.  DE    Antigens, CD4/METABOLISM  *Cell Fusion  Cell Line  HIV Envelope Protein
  50.        gp120/*PHYSIOLOGY  HIV-1/PHYSIOLOGY  HN Protein/PHYSIOLOGY
  51.        Paramyxovirus/*PHYSIOLOGY  Recombinant Proteins  Support, U.S. Gov't,
  52.        P.H.S.  Vaccinia Virus  Viral Envelope Proteins/PHYSIOLOGY  Viral Fusion
  53.        Proteins/*PHYSIOLOGY  JOURNAL ARTICLE
  54.  
  55.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  56.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  57.  
  58.